使用超高效合相色譜系統(tǒng)測定雌二醇(Estradiol)色譜純度

　　目前，美國藥典(USP)檢測雌二醇(estradiol)色譜純度的方法使用4.6 x 250 mm的硅膠柱和含有2,2,4-三甲基戊烷、正丁基氯、甲醇45:4:1的流動相，流速2 mL/min。由于許多實驗室都想限制脂肪烴和氯化物溶劑的使用，所以必須對替代性的色譜方法，如超臨界流體色譜(SFC)進行評估。沃特世ACQUITY UPC2系統(tǒng)被用于開發(fā)測定雌二醇色譜純度的方法。

　　Ultra Performance Convergence Chromatography™(UPC2™)得到的結果直接和由目前的美國藥典檢測雌二醇雜質的方法對比。兩種方法檢測的結果相似，與美國藥典使用的正相HPLC方法相比，UPC2方法檢測雌二醇雜質的靈敏度更高。此外，使用UPC2時，樣品的運行時間大大縮短，每次分析的總成本也顯著降低(基于溶劑用量和廢液處理成本計算)。

　　使用UPC2方法測定雌二醇的色譜純度，其速度是目前正相HPLC方法的3倍，而單次分析的成本降低100多倍。

　　解決方案

　　使用現(xiàn)行美國藥典方法制備和分析雌二醇，如圖1所示。HPLC分析的結果同ACQUITY UPC2系統(tǒng)分析的結果(使用相同的樣品制備方法)進行對比。

　　UPC2方法的條件如下：

　　色譜柱： ACQUITY UPC2 BEH，2.1 x 150 mm，1.7 微米

　　流動相： A=CO2 B=1:1甲醇/異丙醇

　　背壓： 130 bar/1880 psi

　　柱溫： 45 °C

　　檢測： UV /PDA，280 nm

　　兩種測試方法得到的結果對比見表1。正相HPLC方法和UPC2均檢出至少5種含量小于0.1%(按面積計算)雜質。兩種方法在0.01%范圍內峰的信噪比約為3:1，UPC2結果得到的值稍高。UPC2方法測得的最大雜質(以面積計約0.05%)的信噪比為16:1，正相HPLC方法測得的為9:1。這些實驗結果清晰地表明，ACQUITY UPC2系統(tǒng)可成功地用于分析雌二醇中的微量雜質。UPC2方法的運行時間明顯短于正相HPLC方法所用的時間(20min對比60min)，從而提高了實驗室的生產率。對每次運行的成本分析表明，正相HPLC的溶劑成本5.89美元，而使用UPC2，每次運行的成本僅為0.05美元。正相HPLC方法所

　　產生需要處理的混合氯化物廢液為108Ml2,2,4-三甲基戊烷、9.6mL正丁基氯和2.4mL甲醇。UPC2方法產生的需處理

　　廢液為甲醇和異丙醇各0.60mL。分離中使用的CO2通過實驗室排氣管排出。使用UPC2方法，廢液處理成本降低了150倍之多。2,2,4-三甲基戊烷、9.6mL正丁基氯和2.4mL甲醇。UPC2方法產生的需處理廢液為甲醇和異丙醇各0.60mL。分離中使用的CO2通過實驗室排氣管排出。使用UPC2方法，廢液處理成本降低了150倍之多。